Obesidad y monocitos macrófagos en el tejido adiposo / Adipose tissue monocytes and macrophages in obesity

Introducción: el tejido adiposo ha sido objeto de estudio en las últimas décadas y existen nuevos conceptos de su compleja biología. Se conoce que la obesidad está asociada con un estado inflamatorio crónico de bajo grado tanto local como sistémico y parece desempeñar un papel clave en las consecuencias del aumento en diferentes comorbilidades metabólicas y vasculares. Discusión: de los diversos tipos de células inmunes que contribuyen a la inflamación inducida por la obesidad, los monocitos/macrófagos en el tejido adiposo juegan un papel central. Las modificaciones estructurales y fenotípicas de ambas células pueden contribuir no solo a alteraciones inflamatorias y metabólicas, sino también ayudar a mantener la homeostasis del tejido adiposo en respuesta al aumento de la grasa corporal. Los macrófagos son células efectoras esenciales en la organización de la inflamación, ya que se cree que promueven la progresión de la obesidad y los trastornos relacionados. No está completamente establecido si dichas células ejercen un papel beneficioso o nocivo en el tejido adiposo. En cualquier caso, su presencia modifica la biología de las células adiposas especializadas. Conclusiones: en esta revisión se analiza el conocimiento sobre la contribución de los monocitos/macrófagos dentro del tejido adiposo en el desarrollo y mantenimiento de la obesidad y las complicaciones potenciales relacionadas.

Importancia de los macrófagos cargados con hemosiderina en el diagnóstico de la hemorragia alveolar difusa / Importance of hemosiderin-loaded macrophages in diagnosis of diffuse alveolar hemorrhage / A importância dos macrófagos carregados com hemosiderina no diagnóstico de hemorragia alveolar difusa / Reconocimiento a la trayectoria del Prof. Dr. Juan Miguel Castagnino†

Resumen La hemorragia alveolar difusa (HAD) es un síndrome clínico con una alta mortalidad que compromete la función respiratoria. Su diagnóstico se basa en pruebas clínicas, radiológicas y citológicas. El objetivo del trabajo fue ratificar el valor de referencia de hemosiderófagos en lavados broncoalveolares (BAL) (hemosiderófagos ≥20%), correlacionar con la etiología y definir las condiciones preanalíticas para que la reacción de Perls alcance valores elevados de sensibilidad. De 109 muestras de pacientes con sospecha de HAD, se analizaron 90 por cumplir los criterios de inclusión; 36 resultaron positivas para HAD, 3 falsamente negativas y 51 resultaron negativas. La sensibilidad fue de 92% y la especificidad de 100%. La mediana de hemosiderófagos para muestras con diagnóstico de HAD fue de 70%. Se agruparon según la etiología: procesos infecciosos puros (PI), enfermedades autoinmunes puras (EA), enfermedades neoplásicas puras (EN), enfermedades autoinmunes más procesos infecciosos (EA+PI), enfermedades neoplásicas más procesos infecciosos (EN+PI), misceláneas (MI). La mediana de hemosiderófagos para cada grupo fue: PI (n=7) 50%, EA (n=15) 58%, EN (n=6) 73%, EA+PI (n=5) 80%, EN+PI (n=4) 80%, MI (n=2) 45% (p=0,57). El porcentaje de pacientes fallecidos fue de 49% (n=19), con una mediana de hemosiderófagos de 70%, en comparación con la de pacientes no fallecidos de 64% (p=0,25). Se ratificó el valor de referencia para establecer el diagnóstico de HAD en muestras de BAL obtenidas luego de las 36 h de comenzados los síntomas utilizando la reacción de Perls, la cual demuestra una alta sensibilidad y especificidad para dicho diagnóstico.

Abstract Difusse alveolar hemorrhage (DAH) is a clinical syndrome with high mortality. Its diagnosis is based on clinical, radiological and cytological tests. The objective of this study was to ratify the reference value of hemosiderophages in bronchoalveolar lavages (BAL) (hemosiderophagues ≥20%), to correlate with the etiology and define the pre-analytical conditions for the Perls reaction to reach high sensitivity values. Out of the 109 samples from patients with suspected ADH, 90 were analysed for meeting the inclusion criteria; 36 were positive for HAD, 3 were false negatives, and 51 were negative (sensitivity 92%; specificity 100%). The median number of hemosiderophagues for samples with a diagnosis of ADH was 70%; they were grouped according to etiology: pure infectious processes (PI), pure autoimmune diseases (AD), pure neoplastic diseases (ND), autoimmune diseases plus infectious processes (AD + PI), and miscellaneous (MI). The median number of hemosiderophagues for each group was: PI (n=7) 50%, AD (n=15) 58%, ND (n=6) 73%, AD + PI (n=5) 80%, ND + PI (n=4) 80%, MI (n=2) 45% (p=0.57). The percentage of deceased patients was 49% (n=19), with a median hemosiderophague of 70%, compared with 64% of non-deceased patients (p=0.25). The reference value to establish the diagnosis of ADH in BAL simples obtained 36 hours after the beginning of symptoms using the Perls reaction was ratified, which shows a high sensitivity and specificity to make the diagnosis of ADH.

Resumo A hemorragia alveolar difusa (HAD) é uma síndrome clínica com alta mortalidade que compromete a função respiratória. Seu diagnóstico se baseia em testes clínicos, radiológicos e citológicos. O objetivo do trabalho foi ratificar o valor de referência de hemossiderófagos em lavagens broncoalveolares (LBA) (hemossiderófagos ≥20%), relacioná-los com a etiologia e definir as condições pré-analíticas para que a reação de Perls alcance valores elevados de sensibilidade. De 109 amostras de pacientes com suspeita de HAD, 90 foram analisadas para cumprir com os critérios de inclusão; 36 resultaram positivas para HAD, 3 foram falsos negativos e 51 resultaram negativas. A sensibilidade foi de 92% e a especificidade de 100%. A média de hemossiderófagos para amostras com diagnóstico de HAD foi de 70%, eles foram agrupados de acordo com a etiologia: processos infecciosos puros (PI), doenças autoimunes puras (DA), doenças neoplásicas puras (DN), doenças autoimunes mais processos infecciosos (DA+PI), doenças neoplásicas mais processos infecciosos (DN+PI), miscelâneas (MI). A média de hemossiderófagos para cada grupo foi: PI (n=7) 50%, DA (n=15) 58%, DN (n=6) 73%, DA+PI (n=5) 80%, DN+PI (n=4) 80%, MI (n = 2) 45% (p= 0,57). A porcentagem de pacientes falecidos foi de 49% (n=19), com uma média de hemossiderófagos de 70%, em comparação com 64% de pacientes não falecidos (p=0,25). Foi ratificado o valor de referência para estabelecer o diagnóstico de HAD em amostras LBA obtidas 36 horas após o início dos sintomas através da reação de Perls, que apresenta alta sensibilidade e especificidade para esse diagnóstico.

La sucralosa promueve la polarización a macrófagos proinflamatorios M1

RESUMEN La sucralosa es un edulcorante no calórico de amplio consumo a nivel mundial, es considerado como un aditivo seguro, debido a que es eliminado en periodos cortos de tiempo. Recientemente se evidenció su bioacumulación en tejido adiposo, donde se encuentran inmersos macrófagos, células del sistema inmune involucradas en el desarrollo de la inflamación sistémica de bajo grado. A la fecha, no se cuenta con suficiente información para demostrar si los edulcorantes potencian los procesos inflamatorios alterando la función de células presentes en tejido y/o contribuyen en el desarrollo de patologías metabólicas. Por lo anterior, en nuestro trabajo se evaluó el efecto de la sucralosa en la viabilidad de los macrófagos diferenciados de la línea celular monocítica THP-1, por azul de tripán y ensayos de MTT, así como su efecto en la polarización M1/M2 por PCR según la expresión de IRF4, IRF5, STAT1, STAT6, perfil de expresión de IL-6, IL-12, TNF-α, TGF-β, IL-10 y SOCS3 por qPCR, y la cuantificación de la quimiocina IP-10 por ELISA. Los resultados indicaron que la sucralosa no tiene efectos citotóxicos, pero disminuye el número de células viables metabólicamente activas determinadas por MTT de manera dependiente de la concentración. La sucralosa incrementa la concentración de la quimiocina IP-10 y la expresión génica del factor de transcripción IRF5 y disminuye la expresión de IRF4 y STAT6, favoreciendo la polarización hacia poblaciones M1. La bioacumulación de sucralosa en tejido adiposo, y su interacción con macrófagos, podría inducir su polarización a M1.

ABSTRACT Sucralose is a non-nutritive sweetener widely consumed worldwide; it is considered a safe additive because it is eliminated quickly. Recently its bioaccumulation in adipose tissue was evidenced, where macrophages, cells of the immune system involved in developing low-grade systemic inflammation, are found. To date, there is a paucity of information regarding whether sweeteners potentiate inflammatory processes by altering the function of cells present in tissue and/or contribute to the development of metabolic pathologies. We evaluate the effect of sucralose on the viability of differentiated macrophages of the monocytic cell line THP-1, by trypan blue and MTT assays, respectively, as well as its effect on M1/ M2 by PCR according to the expression of IRF4, IRF5, STAT1, STAT6, expression profile of IL6, IL-12, TNF-α, TGF-β, IL-10 and SOCS3 by qPCR, and the quantification of the chemokine IP-10 by ELISE. The results indicated that sucralose has no cytotoxic effects but decreases the number of metabolically active viable cells determined by MTT of macrophages in a concentration-dependent manner. Sucralose increased the concentration of the chemokine IP-10 and the gene expression of the transcription factors IRF5 and decreased the expression of IRF4 and STAT 6 gene expression, favoring polarization towards M1 populations. The bioaccumulation of sucralose in adipose tissue, and its interaction with macrophages, could induce its polarization to M1.

Identificación de macrófagos y virus Epstein-Barr en biopsias de pacientes con Síndrome de Sjögren

RESUMEN El síndrome de Sjögren (SS) es una enfermedad crónica mediada inmunológicamente. La presencia de macrófagos y el virus Epstein-Barr (VEB) se ha relacionado con su desarrollo y severidad. Los macrófagos contribuyen al proceso autoinmune local y la infección viral promueve el quiebre de la auto-tolerancia. Objetivos. Identificar la presencia de Macrófagos en el infiltrado inflamatorio y VEB en células inflamatorias, correlacionándolos con las características histológicas de glándulas salivales labiales. Metodología. En biopsias de glándulas salivales labiales (8 pacientes y 7 individuos controles) se realizó inmunohistoquímica antiCD-68 para identificar macrófagos. El conteo de macrófagos y células inflamatorias se efectuó en relación a su distribución en las glándulas salivales. La presencia del virus fue evaluada mediante hibridación in situ e inmunohistoquímica para LMP1. Se utilizó el test t no pareado y de Mann-Whitney para comparar los grupos, y coeficiente de correlación de Pearson para correlacionar con parámetros histológicos. Resultados. Se observó un mayor número de macrófagos en el infiltrado inflamatorio de pacientes (p=0,001**). Los macrófagos se distribuyeron difusamente en las glándulas de controles y en los focos inflamatorios de pacientes. En ambos grupos no se detectó la presencia del virus Epstein-Barr. Conclusión. Los pacientes con síndrome de Sjögren presentaron mayor presencia de macrófagos y su incremento es a expensas del foco inflamatorio.

ABSTRACT: Sjögren's syndrome (SS) is an immunologically mediated chronic disease of complex etiopathogenesis. Macrophages and Epstein-Barr virus are among the factors related to its development and severity. Macrophages contribute to the local autoimmune process and viral infection promotes the breakdown of self-tolerance. Objectives. Identify the presence of macrophages in the inflammatory infiltrate and Epstein-Barr virus in inflammatory cells, correlating them with the histological features of labial salivary glands. Methodology. In labial salivary glands biopsies of 8 patients and 7 control individuals, anti-CD-68 immunohistochemistry was performed to identify macrophages. The macrophages and inflammatory cells were counted in relation to their distribution in the salivary glands. The presence of the virus was evaluated by in situ hybridization for viral RNA and immunohistochemistry for latent membrane protein type 1. The comparison between both groups was made using the unpaired t-test and Mann-Whitney test. The correlations with histological parameters were established with the Pearson´s correlation coefficient. Results. A greater number of macrophages was observed in the inflammatory infiltrate of SS patients (p=0,001**). Macrophages in control individuals were diffusely distributed in the gland, while, SS in patients, they were mainly located in inflammatory foci. In both groups, no inflammatory or epithelial cells infected by the Epstein-Barr virus were identified. Conclusion. Patients with Sjögren's syndrome had a greater presence of macrophages and their increase is at the expense of the inflammatory focus.

Are statins a risk factor in patients with atherosclerosis? / ¿Son las estatinas un factor de riesgo en pacientes con aterosclerosis?

SUMMARY: Statins inhibit cholesterol synthesis, but also have other pleiotropic effects. There are indications that they affect macrophage survival trough the regulation of apoptosis. We analyzed 50 samples of aortic wall, selected based on statins in patients' therapy (n=25, Th-S group) or statin-free therapy (n=25, Th-nonS group). Each group had 5 samples of healthy aortic tissue, 10 samples of mild and 10 samples of severe atherosclerotic changes in aortic wall. Tissue was stained with hematoxylin-eosin and immunohistochemical methods (anti-Bcl-2 antibody). Presence of Bcl2-positive macrophages (Bcl-2+ MP) was determined semiquantitatively, and data were processed in Microsoft Excell and IMB SPSS 23 Statistics. 60 % of patients in the Th-S group had a mild increase of Bcl-2+ MP The use of statins leads to a significantly more frequent increase in Bcl2+ macrophages in the intima of the healthy aortic tissue. Analysis of all aortic samples with pathohistological diagnosis showed that statin therapy was statistically significantly more often leading to a markedly increased presence of Bcl-2+ MP. In the media, all samples of the Th-S group have a mild increase of Bcl-2+ MP, and in adventitia 40 % of patients. The use of statins more often leads to a markedly increased presence of Bcl-2+ MP in aortic tissue with diagnosed mild and severe atherosclerosis. In samples of severe atherosclerosis, statins lead to a markedly increased presence of Bcl-2+ MP in the parts of the plaque towards the intima and towards the media. Statins lead to an increased presence of Bcl-2+ macrophages, prolong their life, both in healthy and atherosclerotic altered aortic tissue. This indicates potentiation of inflammation and damage to the aortic wall, and calls into question the positive effect of statins on the aortic wall with atherosclerosis.

RESUMEN: Las estatinas inhiben la síntesis de colesterol, pero también tienen otros efectos pleiotrópicos. Hay indicios de que afectan la supervivencia de los macrófagos a través de la regulación de la apoptosis.Se analizaron 50 muestras de pared aórtica, seleccionadas en base a estatinas en tratamiento de pacientes (n=25, grupo Th-S) o en tratamiento libre de estatinas (n=25, grupo Th- nonS). Cada grupo tenía 5 muestras de tejido aórtico sano, 10 muestras de cambios ateroscleróticos leves y 10 muestras de cambios ateroscleróticos severos en la pared aórtica. El tejido se tiñó con hematoxilina-eosina y métodos inmunohistoquímicos (anticuerpo anti-Bcl-2). La presencia de macrófagos positivos para Bcl2 (Bcl- 2+ MP) se determinó semicuantitativamente y los datos se procesaron en Microsoft Excell e IMB SPSS 23 Statistics. El 60 % de los pacientes del grupo Th-S tuvo un aumento leve de Bcl-2+ MP. El uso de estatinas conduce a un aumento significativamente más frecuente de macrófagos Bcl2+ en la íntima del tejido aórtico sano. El análisis de todas las muestras aórticas con diagnóstico anatomopatológico mostró que la terapia con estatinas fue significativamente más frecuente desde el punto de vista estadístico, lo que condujo a una presencia marcadamente mayor de Bcl-2+ MP. En los medios, todas las muestras del grupo Th-S tienen un leve aumento de Bcl-2+ MP, y en adventicia en el 40 % de los pacientes. El uso de estatinas con mayor frecuencia conduce a una presencia marcadamente mayor de MP Bcl-2+ en el tejido aórtico con aterosclerosis leve y grave diagnosticada. En muestras de aterosclerosis severa, las estatinas conducen a una presencia aumentada de Bcl-2+ MP en las partes de la placa hacia la íntima y hacia la media. Las estatinas conducen a una mayor presencia de macrófagos Bcl-2+, prolongan su vida, tanto en tejido aórtico sano como aterosclerótico alterado. Esto indica la potenciación de la inflamación y el daño a la pared aórtica y pone en duda el efecto positivo de las estatinas en la pared aórtica con aterosclerosis.

Efeito da fumaça do cigarro na periodontite apical induzida em ratos: análise do perfil inflamatório e imuno-histoquímica macrofágica / Effect of cigarette smoke inhalation on induced apical periodontitis in rats: inflammatory profile and macrophage immunohistochemistry analysis

Objetivo: Avaliar a severidade da periodontite apical (PA) em ratos expostos à fumaça do cigarro, por meio da análise histológica do perfil inflamatório e imunomarcação macrofágica. Material e Métodos: Foram utilizados trinta e dois ratos machos Wistar distribuídos em quatro grupos (n=8): PA (ratos com PA induzida); F (ratos expostos à fumaça do cigarro); FPA (ratos com PA induzida expostos à fumaça do cigarro); C (ratos sem PA e sem exposição ao cigarro). Para inalação da fumaça do cigarro, os animais permaneceram em câmara de tabagismo por oito minutos, três vezes ao dia por vinte dias antes da indução da PA. Em seguida, os animais tiveram as polpas coronárias expostas ao meio oral por 30 dias para a indução da PA e continuaram inalando fumaça até completarem 50 dias. No momento da eutanásia, as hemi-maxilas do lado direito foram removidas para avaliar o perfil inflamatório por coloração em hematoxilina e eosina e imuno-histoquímica para marcação macrofágica F4/80 (macrófago), CD206 (M2) e iNOS (M1). Dados não paramétricos foram analisados por Kruskal-Wallis, seguido de post-hoc Dunn e Mann- Whitney (P<.05). Resultados: O infiltrado inflamatório foi moderado no grupo PA e intenso no grupo FPA (P>.05). Na imunomarcação de macrófagos M1, os grupos C e F apresentaram diferenças significantes quando comparado aos grupos PA e FPA (P<0,05). No anticorpo F4/80 não houve diferença entre os grupos (P>.05). Conclusão: A inalação da fumaça do cigarro em ratos contribuiu para uma reação inflamatória periapical mais intensa, com presença predominante de macrófagos pró-inflamatórios M1, agravando a severidade da periodontite apical(AU)

Objective: To evaluate the severity of apical periodontitis (AP) in rats exposed to cigarette smoke, through histological analysis of the inflammatory profile and macrophage immunostaining. Material and Methods: thirty-two male Wistar rats were used, distributed into four groups (n=8): PA (rats with induced AP); F (rats exposed to cigarette smoke); FPA (AP-induced rats exposed to cigarette smoke); C (rats without AP and without exposure to cigarettes). For cigarette smoke inhalation, animals remained in a smoking chamber for eight minutes, three times daily for twenty days before AP induction. Then, animals had the coronary pulp exposed to oral environment for 30 days to induce AP while continued inhaling smoke until completing 50 days of experimental period. During euthanasia process, the right hemimaxillas were removed to assess inflammatory profile by hematoxylin and eosin staining and immunohistochemistry for macrophage immulabeling: F4/80 (macrophage), CD206 (M2) and iNOS (M1). Nonparametric data were analyzed by Kruskal-Wallis, followed by post-hoc Dunn and Mann-Whitney (P<.05). Results: The inflammatory infiltrate was moderate in the PA group and intense in the FPA group (P<.05). Histomorphometric analysis of M2 macrophages revealed statistical differences between groups C and PA, and F and FPA (P>.05). In the immunostaining of M1 macrophages, groups C and F showed significant differences when compared to groups PA and FPA (P<0.05). While the PA and FPA groups presented a large amount of immunoreactive cells, being higher for the FPA group (P<0.05). In the F4/80 antibody there was no difference between the groups (P>.05)Conclusion: Inhalation of cigarette smoke in rats contributed to a more intense periapical inflammatory reaction, with a predominant presence of pro-inflammatory M1 macrophages, aggravating the severity of apical periodontitis(AU)

A influência de macrófagos M1, M2 e TAM, e do receptor P2X7 na invasividade e resistência de neuroblastoma / The influence of different macrophages' phenotypes, and of the P2X7 receptor, on the invasiveness and chemoresistance of neuroblastoma

O neuroblastoma é um tumor sólido muito comum em crianças. O estágio mais avançado da doença é altamente agressivo e invasivo, além de pouco responsivo à terapia, que é limitada por mecanismos de resistência e reincidência relacionados à metástase. Muitos estudos tem sido feitos para identificar mecanismos de invasão e quimioresistência de células tumorais, afim de aumentar a sobrevida dos pacientes com câncer. Nesse trabalho, nós estudamos o efeito dos macrófagos, as células imunes mais abundantes no microambiente tumoral, os TAMs (do inglês tumor-associated macrophage) e do receptor P2X7, um purinoreceptor acionado por ATP, nesses processos. Os TAMs respondem e atuam de acordo com a miríade de fatores que encontram, podendo gerar populações heterogêneas e com funções distintas, tanto antitumorais, como pró-tumorais. Altos níveis de ATP extracelular são encontrados no microambiente tumoral, podendo então ativar o receptor P2X7. Este receptor tem sido relacionado tanto a funções inflamatórias como funções na resolução da inflamação de macrófagos. Além disso, o receptor P2X7 está envolvido em uma variedade de eventos celulares, incluindo a secreção de mediadores pró-inflamatórios, a proliferação celular e a apoptose de células tumorais. Primeiramente, foi avaliado o papel do receptor P2X7 na polarização de macrófagos da derivados medula óssea de camundongos wild-type e nocaute para o P2X7 na presença e ausência de fatores secretados por células de neuroblastoma, e então foi estudada a influência desses diferentes macrófagos polarizados em eventos celulares de grande relevância clínica para o neuroblastoma: a invasividade e quimiorresistência. Os resultados demonstraram que, apesar do reconhecido envolvimento do receptor P2X7 na inflamação, a ausência deste receptor não atenua a expressão de marcadores característicos do fenótipo inflamatório, M1. O aumento da expressão do receptor P2Y2, também envolvido na inflamação, nessas células, sugere um mecanismo genético de compensação para não atenuação da inflamação em macrófagos que não expressam o receptor P2X7. Contudo, a ausência do receptor P2X7 levou a alterações no fenótipo alternativo, M2, de modo que a expressão de Tnf, marcador de M2, não foi reprimido. TAMs noucates para P2X7 tiveram a expressão de arg1, marcador de M2, suprimida, reforçando a importância do receptor P2X7 no estabelecimento de fenótipos ativados alternativamente. Nossos dados também sugerem que ausência do receptor P2X7 em TAMs permite a aquisição de um fenótipo capaz de tornar as células de neuroblastoma que expressam P2X7 mais invasivas e mais quimioresistentes à vincristina. Por outro lado, TAMs, independentemente da presença ou ausência do receptor P2X7, induziram a proliferação e quimioresistência das células de neuroblastoma silenciadas para o receptor P2X7, o que nos leva a concluir que o receptor P2X7 em TAMs é desfavorável à progressão de tumores expressando P2X7

Neuroblastoma is a highly common childhood solid tumor. The most advanced stage of the disease is highly aggressive and invasive, besides from being poorly responsive to therapies, which are limited by resistance and recurrence mechanisms related to metastasis. Several studies attempt to identify invasion and resistance mechanisms of the tumor cells in order to increase overall survival of the patients. On the present work, we investigated the effect of macrophages, the most abundant immune cells on the tumor microenvironment, called TAMs (tumor-associated macrophages), and of the P2X7 receptor, an ATP-gated purinoceptor, on these processes. TAMs and cancer cells crosstalk, and behave accordingly to a miriad of factors present at the TME, generating heterogeneous populations with distinct functionalities, either pro- or antitumor. High extracellular levels of ATP are found in the TME, being able to activate the P2X7 receptor. This receptor mediates both pro- and anti-inflammatory functions in macrophages. In addition, it is involved in several cellular events, including the secretion of pro-inflammatory mediators, cell proliferation and tumor cell apoptosis. At first, we evaluated the role of the P2X7 receptor on the polarization of bone marrow-derived macrophages (BMDM), either wild-type or knockout for the P2X7 receptor, in presence or absence or factors secreted by neuroblastoma cells. Next, we investigated the influence of the polarized macrophages in highly relevant cellular events for neuroblastoma, such as invasiveness and chemoresistance. Our results showed that, despite the known involvement of P2X7 receptor on inflammation, its absence did not decrease the expression if inflammatory markers of M1 macrophage populations. An increase in the expression of the P2Y2 receptor, also involved in inflammation, on these cells suggest a genetic compensation mechanism for preventing attenuation of inflammation when P2X7 is lacking. However, P2X7 receptor absence did compromise the M2 phenotype, driving the expression of Tnf. TAMs knockout for the P2X7 receptor were not able to express arg1, also an M2 marker, reinforcing a role of the P2X7 receptor on establishing alternative macrophage phenotypes. Our data also suggest that TAMs lacking the P2X7 receptor acquire a phenotype capable of turning P2X7R-expressing neuroblastoma cells more invasive and chemoresistant to vincristine. On the other hand, TAMs, independently on the presence of the P2X7 receptor, induced proliferation and resistance of neuroblastoma cells silenced for P2X7 receptor expression, leading us to the conclusion that the P2X7 receptor in TAMs is unfavorable for the progression of P2X7R-expressing tumors

Análise dos mecanismos pró-inflamatórios do ácido úrico solúvel: efeito sobre proteínas sensíveis à modulação redox e sobre a polarização de células THP-1 / Analysis of the pro-inflammatory mechanisms of soluble uric acid: effect on redox sensitive proteins and THP-1 cell polarization

Vários estudos epidemiológicos estabelecem correlação positiva entre os níveis de ácido úrico sérico e o aumento do risco para doenças cardiovasculares. Fatores dietéticos e socioeconômicos, além da presença de comorbidades estão diretamente associados aos níveis séricos de ácido úrico. Países desenvolvidos apresentam maior incidência e prevalência da gota e alguns grupos étnicos são particularmente susceptíveis à hiperuricemia. Cristais de ácido úrico são descritos por iniciar e perpetuar resposta inflamatória, e sinalizar um padrão de resposta molecular associado ao dano (DAMP), permitindo a diferenciação de macrófagos para perfis pró-inflamatórios. Por outro lado, os efeitos do ácido úrico em sua forma solúvel ainda carecem de estudos. Macrófagos derivados de precursores monocíticos apresentam diferenciação específica e respondem a um conjunto de fatores extrínsecos, resultando em perfis distintos, um fenômeno conhecido como polarização. Assim, os macrófagos podem ser classicamente ativados para uma resposta Th1 (T helper 1) e polarizados a um perfil pró- inflamatório (M1, resposta Th1) ou a um perfil alternativo e oposto, um perfil de resolução da inflamação (M2, resposta Th2, T helper 2). Nesse sentindo, buscamos analisar os efeitos do ácido úrico solúvel sobre vias de modulação da polarização fenotípica de macrófagos e modificação redox. Utilizamos a linhagem monocítica humana THP-1, a qual foi diferenciada em macrófagossímile por acetato miristato de forbol (PMA; 5 ng.mL-1) por 48 h, seguidas da incubação com ácido úrico em meio ausente de tióis e soro fetal bovino por 8h ou 24h (0-1000 µM). A expressão de fatores de transcrição e marcadores de polarização foi realizada através de citometria de fluxo, western-blotting e por microscopia de fluorescência com alto conteúdo de imagens (HCI). Em concentrações fisiológicas, verificamos que o ácido úrico solúvel regulou positivamente a frequência de células para receptor manose CD206, um marcador clássico de perfil alternativo/M2 e regulou negativamente a expressão óxido nítrico sintase induzível (iNOS), um marcador M1, sugerindo inicialmente uma modulação para o perfil de polarização M2. Além disso, as proteínas redoxsensíveis, heme oxigenase-1 (HO-1) e tiorredoxina (Trx) tiveram sua expressão reduzida e aumentada, respectivamente, pelo tratamento com ácido úrico. Os fatores de transcrição Nrf2 e STAT3 tiveram regulação negativa após a exposição ao ácido úrico solúvel. Os resultados apresentados nesta tese sugerem uma função do urato no priming de macrófagos através da alteração da polarização destas células

Several epidemiological studies have established a positive correlation between high serum uric acid levels and increased risk for cardiovascular diseases. Developed countries have a higher incidence and prevalence of gout and some ethnic groups are particularly susceptible to hyperuricemia. Although hyperuricemia is a prevalent condition, it has still controversy biological consequences. Uric acid crystals are described as capable of initiating and perpetuating inflammatory responses, by activating the damage-associated molecular response pattern (DAMP) cascade, allowing macrophage differentiation to inflammatory profiles. In spite of that, biological response to soluble uric acid are not completely understood. Monocyte-derived macrophages respond to a set of extrinsic factors that result in different profiles and can be polarized to a proinflammatory (M1) or anti-inflammatory (M2) profile. In this thesis, we analyzed the effects of soluble uric acid on redox-modulated pathways and the phenotypic polarization of macrophages. We used human monocytic THP-1 cell line, differentiated into macrophage by phorbol myristate acetate (PMA; 5 ng.mL-1) for 48 h. After differentiation, cells were incubated with soluble uric acid in medium without thiols and fetal bovine serum for 8 h and 24 h (0-1000 µM). The expression of transcription factors and polarization markers were assessed by flow cytometry, western-blotting and fluorescence microscopy with high content imaging (HCI). At physiological concentrations, soluble uric acid positively regulated the frequency of cells for mannose receptor CD206, a classic marker of the anti-inflammatory M2 profile and negatively regulated the inducible nitric oxide synthase (iNOS) expression, a proinflammatory M1 marker, suggesting that the soluble uric acid changes the polarization profile to M2 profile. In addition, the redox-sensitive proteins heme oxygenase-1 (HO-1) and thioredoxin (Trx) had their expression decreased and increased, respectively, after exposure to urate. STAT3 and Nrf2 transcription factors were downregulated upon soluble uric acid exposure. The results presented in this thesis suggest a role of uric acid in macrophage priming through the alteration of cell polarization

Evaluation of the immunomodulatory activity of thalidomide on tumor-associated macrophages in the 4T1 murine metastatic breast cancer model / [Avaliação do efeito imunomodulador da talidomida em macrófagos associados a tumores no modelo murino de câncer de mama metastático 4T1]

The present work evaluated the immunomodulatory effect of thalidomide (Thal) at different doses on tumor-associated macrophages (TAMs) using a mouse model of human breast cancer. Mice were inoculated with 4T1 cells in the left flank and treated with Thal once a day at concentrations of 50, 100, and 150mg/kg body weight from the 5th day until the 28th day of tumor inoculation. The tumors were sized, proliferation index and TAMs count were evaluated in primary tumors and metastatic lungs. In addition, the metastasis rate was evaluated in the lungs. Thal at 150mg/kg significantly decreased tumor growth, proliferation index, and TAMs infiltration in primary tumors. Conversely, a higher number of TAMs and lower proliferation index were observed in metastatic lungs in mice treated with 150mg/kg of Thal. Furthermore, Thal at 150mg/kg significantly decreased the metastatic nodules in the lungs. Our findings demonstrated that Thal treatment considerably decreased the primary tumor and lung metastasis in mice associated with different TAM infiltration effects in these sites.(AU)

No presente trabalho, foi avaliado o efeito imunomodulador de diferentes doses de talidomida em macrófagos associados ao tumor (TAMs), em um modelo murino de câncer de mama. Camundongos foram inoculados com células 4T1, na região do flanco esquerdo, e tratados com talidomida, uma vez ao dia, nas doses de 50, 100 e 150mg/k, por massa corporal, do quinto dia ao 28º dia de inoculação tumoral. Os tumores foram medidos, o índice de proliferação celular e a contagem de TAMs foram avaliados nos tumores primários e nos pulmões com metástases. Além disso, a taxa de metástases pulmonares também foi avaliada. A talidomida na dose de 150mg/kg diminuiu significativamente o crescimento tumoral, o índice de proliferação celular e a infiltração de TAMs nos tumores primários. Por outro lado, maior número de TAMs e menor índice de proliferação celular foram observados nos pulmões metastáticos, em camundongos tratados com 150mg/kg de talidomida. Ademais, a talidomida na dose de 150mg/kg diminuiu significativamente os nódulos metastáticos nos pulmões. Os resultados demonstraram que o tratamento com talidomida diminuiu o crescimento tumoral e as metástases pulmonares em camundongos, associado com diferentes efeitos na infiltração de TAMs nesses locais.(AU)

Efecto antiinflamatorio y antioxidante in vitro de Curcuma longa sobre macrófagos murinos durante la infección por Helicobacter pylori

RESUMEN Introducción: La colonización por Helicobacter pylori produce una inflamación en la mucosa gástrica con el consecuente desarrollo de enfermedades gastroduodenales. Frente a altas tasas de resistencia antimicrobiana y la ausencia de una vacuna en humanos, la alternativa ha sido la búsqueda de extractos de plantas con propiedades antimicrobiana, antiinflamatoria, antioxidante, antifúngica y anticancerígena como la Curcuma longa. Sin embargo, al ser una especie introducida y adaptada a las condiciones climáticas del país, son necesarios los estudios preclínicos que avalen su potencial antiinflamatorio y antioxidante. Objetivo: Evaluar el efecto del extracto de C. longa sobre macrófagos peritoneales infectados con H. pylori. Métodos: Para evaluar el efecto antiinflamatorio y antioxidante del extracto de C. longa sobre macrófagos murinos infectados por H. pylori, se evaluaron diferentes concentraciones del extracto y relaciones de bacteria, y se evaluó la muerte celular mediante DAPI. Se determinó la producción de óxido nítrico, peróxido de hidrógeno y los niveles de la interleucina-1β. Resultados: La viabilidad del macrófago se afectó frente a concentraciones de 100 µg/mL del extracto de cúrcuma y a partir de 25 bacterias/macrófago. Al combinar las diferentes concentraciones del extracto con las multiplicidades bacterianas se observó una reducción en los niveles de H2O2 e IL-1β; sin embargo, la reducción del óxido nítrico se observó en el rango de 6,25-50 µg/mL del producto natural. Conclusiones: El extracto de cúrcuma cubano mostró potencial antioxidante y antiinflamatorio al disminuir la citotoxicidad celular y la producción de especies reactivas del oxígeno en macrófagos peritoneales.

ABSTRACT Introduction: Colonization by Helicobacter pylori causes inflammation of the gastric mucosa with the consequent development of gastroduodenal diseases. In view of the high antimicrobial resistance rates and the absence of a vaccine for humans, the alternative has been to search for plant extracts with antimicrobial, anti-inflammatory, antioxidant, antifungal and anticancer properties. An example is Curcuma longa. However, being as it is a species introduced and adapted to the country's climate conditions, it is necessary to conduct preclinical studies demonstrating its anti-inflammatory and antioxidant potential. Objective: Evaluate the effect of a C. longa extract on peritoneal macrophages infected by H. pylori. Methods: With the purpose of describing the anti-inflammatory and antioxidant effect of C. longa on murine macrophages infected by H. pylori, an evaluation was conducted of various extract concentrations and bacterial relationships, while cell death was assessed by DAPI. Determination was made of nitric oxide and hydrogen peroxide production, as well as of interleukin-1β levels. Results: Viability of the macrophage was affected in the presence of 100 µg/ml concentrations of the turmeric extract and as from 25 bacteria / macrophage. When different concentrations of the extract were combined with the bacterial multiplicities, a reduction was observed in H2O2 and IL-1β levels. However, nitric oxide reduction was observed within the range of 6.25-50 µg/ml of the natural product. Conclusions: The Cuban turmeric extract was found to have antioxidant and anti-inflammatory potential by reducing cell cytotoxicity and the production of reactive oxygen species in peritoneal macrophages.

A novel activity on thymocytes cells exerted by the rattlesnake (Crotalus durissus cumanensis) venom / Nueva actividad de los timocitos estimulada por el veneno de la serpiente de cascabel (Crotalus durissus cumanensis)

Abstract. Introduction: The thymus is active mainly during the neonatal and pre-adolescent periods. Objective: To test naïve thymocytes proliferation and monocytes stimulation. Materials and methods: We collected fresh thymus tissue from neonate mice after surgery. Suspension cells were coated onto Ficoll-Hypaque support. The obtained cells (thymocytes) were cultured measuring the proliferation of naïve T cells stimulated by Crotalus durissus cumanensis (Cdc) venom at sub-lethal doses (20 ng). Then, we supplemented the wells with AlamarBlue™ and incubated them for 5 h to test their proliferation. Mononuclear cells from mice peripheral blood were collected and layered onto the support of the Ficoll-Hypaque solution. We added the thymocytes actively dividing (25 x 105 cells) from cultures stimulated with Cdc venom at 20 ng/well to cultured monocytes freshly obtained from the Ficoll-Hypaque separation. Both cell populations were incubated for 36 h until monocytes matured to macrophages. Results: The naïve thymocytes rapidly proliferated after stimulation with the Cdc venom (NTCdc) and these successively induced the maturation and function of monocytes progenitor cells to mature macrophages, which ingested Chinese ink. Conclusions: The naïve thymocytes proliferated by stimulation with the Cdc venom and subsequently the NT/Cdc induced the rapid maturation and function of monocytes progenitor cells becoming mature macrophages with their phenotypic characteristics.

Resumen. Introducción. El timo es activo principalmente durante los períodos neonatal y preadolescente. Objetivo. Probar la proliferación de los timocitos tempranos y la estimulación de monocitos que producen. Materiales y métodos. Se recogió tejido de timo fresco después de la cirugía de ratones recién nacidos. La suspensión de células se colocó sobre un soporte de Ficoll-Hypaque. Las células obtenidas (timocitos) se cultivaron y se midió la proliferación de células T vírgenes estimuladas por el veneno de Crotalus durissus cumanensis (Cdc) en dosis subletales (20 ng). A continuación, se agregó AlamarBlue™ a los pocillos y se incubaron durante 5 horas para evaluar la proliferación. Se recogieron células mononucleares de sangre periférica de ratones y se colocaron sobre un soporte de solución de Ficoll-Hypaque. Los timocitos que se dividieron activamente (25 x 105 células) a partir de los cultivos estimulados con veneno de Cdc (20 ng/pocillo) y se agregaron a los cultivos de monocitos recién obtenidos de la separación en la solución de Ficoll-Hypaque. Ambas poblaciones celulares se incubaron durante 36 horas hasta que los monocitos maduraron a macrófagos. Resultados Los timocitos tempranos experimentaron una rápida proliferación estimulada por el veneno de Cdc (NTCdc) y, posteriormente, indujeron la maduración y la función de las células progenitoras de monocitos, los cuales maduraron a macrófagos, que se tiñeron con tinta china. Conclusiones. Los timocitos tempranos proliferaron con la estimulación del veneno de Cdc y, posteriormente, el NT/Cdc indujo la maduración rápida y la función de las células progenitoras de monocitos, transformándose en macrófagos con sus características fenotípicas.

Avaliação in vitro e in vivo do potencial imunomodulador de frações polissacarídicas extraídas do chuchu / In vitro and in vivo evaluation of the immunomodulatory potential of polysaccharide fractions extracted from chayote

Os polissacarídeos não amido constituem importante parcela das fibras dietéticas, e podem ser considerados modificadores de resposta biológica (MRBs), uma vez que são capazes de interagir com o sistema imune, e suas características estruturais estão atreladas aos efeitos biológicos gerados. O potencial imunomodulador dos polissacarídeos do chuchu já foi demonstrado, entretanto, informações sobre suas características estruturais e sua relação com o perfil imunológico são limitadas a ensaios in vitro, não havendo, até o momento, estudos in vivo. Assim, o objetivo do estudo foi avaliar, in vitro e in vivo, o perfil imunomodulador de frações isoladas do polissacarídeo do chuchu. Por meio da filtração tangencial foram obtidas as frações de estudo, SeRI<50 e SeSE<50, respectivamente as frações isoladas do polissacarídeo do chuchu extraídas do resíduo insolúvel e do sobrenadante pós-tratamento enzimático para retirada do amido com peso molecular menor que 50 kDa. A caracterização por meio da determinação da composição monossacarídica e da análise de ligação apontou que ambas as frações são formadas por galacturonanos, arabinanos, arabinogalactanos e glicomananos. A SeRI<50 é menos ramificada e, provavelmente, composta por galactanos, enquanto SeSE<50 é mais ramificada e, provavelmente, composta por galactuglucomananos. Essas frações foram capazes de estimular os macrófagos murinos RAW 264.7 e as células mononucleares do baço, do sangue e do intestino delgado de camundongos Balb/c, sugerindo um perfil de ação mais pró-inflamatório, com base nos efeitos produzidos pelas espécies reativas de oxigênio, citocinas e pelos marcadores de ativação de linfócitos. Ambas as amostras, SeRI<50 e SeSE<50, mostraram ser eficientes em ativar a cascata imunológica, não sendo citotóxicas mesmo com a maior concentração testada no ensaio in vitro

Non-starch polysaccharides are important components of dietary fibers, and they may be considered biological response modifiers (MRBs), as they may interact with the immune system, depending on their structural characteristics. The immunomodulatory potential of chayote polysaccharides has already been demonstrated, however, information on their structural characteristics and their relationship with the immunological profile are limited to in vitro assays, with no reports on in vivo studies. Thus, the objective of the study was to evaluate, in vitro and in vivo, the immunomodulatory profile of polysaccharide from chayote. Through tangential filtration two fractions, SeRI <50 and SeSE <50, were obtained, respectively the fraction isolated from the chayote polysaccharide extracted from the insoluble residue and the fraction from the enzymatic post-treatment supernatant to remove starch, both under molecular weight 50 kDa. The monosaccharide composition and linkage analysis showed that both fractions are formed by galacturonans, arabinans, arabinogalactans and glycomanans. SeRI <50 is less branched and probably composed of galactans, while SeSE <50 is more branched and probably composed of galactuglucomannans. These fractions were able to stimulate murine macrophages RAW 264.7 and mononuclear cells of the spleen, blood and small intestine of Balb / c mice, suggesting a more proinflammatory action profile, based on the reactive oxygen species production, cytokines and lymphocyte activation markers. Both samples, SeRI <50 and SeSE <50, were able to efficiently activate the immunological cascade, not being cytotoxic even at the highest concentration tested in the in vitro assay

Fallo multiorgánico en pacientes portadores del virus de inmunodeficiencia humana, ¿cuándo pensar en Síndrome Hemofagocítico?. A propósito de dos casos clínicos

Resumen: El síndrome hemofagocítico es una enfermedad infrecuente y de alta mortalidad. El término hemofagocitosis describe la presencia de macrófagos activados que incorporan dentro de su citoplasma eritrocitos, leucocitos y plaquetas. Cuando esto ocurre en el contexto de una respuesta inmune exagerada e ineficaz, se denomina síndrome hemofagocítico. Se clasifica en primario cuando se asocia a alteraciones genéticas generalmente hereditarias, y secundario, más frecuente en adultos, cuando se desencadena por alguna enfermedad o condición subyacente. El diagnóstico requiere de un alto grado de sospecha y se realiza según criterios diagnósticos establecidos, siendo la sepsis el principal diagnóstico diferencial. Se comentan dos casos de hombres jóvenes con infección por virus de la inmunodeficiencia humana en estadío avanzado, que se presentan con fiebre y fallo multiorgánico, en los que se hace el diagnóstico de síndrome hemofagocítico secundario.

Abstract: The hemophagocytic syndrome is an infrequent and fatal disease. The concept of hemophagocytosis describes the presence of activated macrophages that incorporate within their cytoplasms erythrocytes, leukocytes and platelets. When it occurs in the context of an exaggerated and inefficient immune response, it is called hemophagocytic syndrome. It is classified in primary when it is associated with genetic alterations generally hereditary, and secondary, more frequent in adults, when it is triggered by a disease or an underlying condition. The diagnosis requires a high grade of suspicion and is based on established diagnostic criteria, being sepsis the main differential diagnosis. We present two cases of young men with advanced infection by the human immunodeficiency virus, who developed fever and multiorgan failure, arriving at the diagnosis of secondary hemophagocytic syndrome.

Resumo: A síndrome hemofagocítica é uma doença rara e com alta mortalidade. O termo hemofagocitose descreve a presença de macrófagos ativados que incorporam eritrócitos, leucócitos e plaquetas em seu citoplasma. Quando ocorre no contexto de uma resposta imune exagerada e ineficaz, é chamada de síndrome hemofagocítica. É classificada como primária quando é associada a alterações genéticas geralmente hereditárias, e secundária quando é desencadeada por uma doença ou condição de base, mais frequente em adultos. O diagnóstico exige alto grau de suspeita e é feito de acordo a critérios com diagnósticos estabelecidos, sendo a sepse o principal diagnóstico diferencial. São discutidos dois casos de homens jovens com infecção pelo vírus da imunodeficiência humana em estágio avançado, apresentando febre e falência de múltiplos órgãos, fazendo o diagnóstico de síndrome hemofagocítica secundária.

Pioderma gangrenoso paraneoplásico en una paciente con recaída de leucemia mieloide aguda / Paraneoplastic bullous pyoderma gangrenosum occurring in a patient with a relapse of an acute myeloid leukemia

Resumen El pioderma gangrenoso ampolloso fue descrito por primera vez en 1972. Se presenta el caso de una paciente con pioderma gangrenoso asociado a una recaída de leucemia mieloide aguda y se hace una revisión de la literatura sobre el tema.

Abstract Bullous pyoderma gangrenosum was first described by Perry in 1972. We present a case of a patient with paraneoplastic pyoderma gangrenosum associated to relapse of an acute myelogenous leukemia and we review the literature on pyoderma gangrenosum.

Enfermedad de Erdheim-Chester: Serie de diecinueve casos y un diagnóstico diferencial de relevancia / Erdheim-Chester Disease: Series of nineteen cases and a relevant differential diagnosis

La enfermedad de Erdheim-Chester (EEC) es una histiocitosis de células no Langerhans de presentación proteiforme y escaso conocimiento. Se presenta una serie de 19 casos de 4 centros, registrados de junio de 2012 a junio de 2019. Se incluyeron aquellos pacientes con clínica, anatomía patológica e inmunohistoquímica característica de la enfermedad. Se excluyeron pacientes con hallazgos indefinidos. Resultados: al igual que en la literatura, el compromiso más frecuente fue el óseo por imagenología, la mitad de estos sintomático. Nuestra serie presenta mayor incidencia de mujeres (casi 70%). Siete pacientes presentaron nódulo mamario como forma de presentación. La mayoría recibieron dosis media de esteroides asociado a otra droga inmunosupresora. La mortalidad fue del 16%. Conclusión: comunicamos una serie de pacientes con la EEC mencionando las características más destacables. Es llamativo el número de pacientes con afectación mamaria, por lo cual proponemos téngase en cuenta en el diagnóstico diferencial de la patología tumoral mamaria.

Erdheim-Chester disease (ECD) is a non-Langerhans histiocytosis, protein manifestations at start and little known. We included 19 patients from June 2012 to June of 2019. Inclusion criteria: clinical features, histopathology and immunostaining compatible with ECD. We excluded patients with undefined features. Results: Bones were the most frequent affected, half of them were asymptomatic. Seventy per cent of the patients were women, and 7 of them developed a nodule breast as first manifestation of ECD. The patients were treated with corticosteroids associated or not with immunosuppressants. The mortality rate was 16%. Conclusion: We reported a series of patients with ECD, enhancing the most frequent features. It is striking the number of patients with breast involvement; we propose to include the Erdheim-Chester disease in differential diagnosis of breast tumor.

Neumonía lipoidea exógena fibrosante en paciente con enfermedad de Parkinson / Fibrosing Exogenous Lipoid Pneumonia in a Patient with Parkinson Disease

Los trastornos deglutorios secundarios a diferentes patologías pueden desencadenar episodios aspirativos hacia la vía aérea, condicionando una injuria pulmonar cuya gravedad dependerá del material aspirado y del tiempo de exposición. Cuando el agente aspirado es de composición oleosa, su aspiración es capaz de desencadenar una reacción inflamatoria pulmonar denominada neumonía lipoidea, pudiendo con el tiempo conducir a una fibrosis parenquimatosa irreversible. En el caso presentado se describe un paciente con trastornos deglutorios e ingesta prolongada de vaselina como laxante. Revisten interés el extenso compromiso asimétrico del parénquima pulmonar y la metodología diagnóstica empleada para identificar los macrófagos pulmonares cargados con lípidos, realizándose una revisión de la evidencia al respecto en la discusión del caso.

Deglutitive disorders that result from different diseases may cause aspiration episodes into the airways, determining a lung injury whose severity will depend on the material that was aspirated and the exposure time. If the aspirated agent has an oily composition, its aspiration is capable of triggering a pulmonary inflammatory reaction called lipoid pneumonia which after some time may cause irreversible parenchymal fibrosis. The case reported in this study describes a patient with deglutitive disorders and prolonged intake of vaseline as laxative. The large assymetric involvement of the lung parenchyma and the diagnostic methodology used to identify lung macrophages charged with lipids take particular importance. A review of the evidence has been carried out in that regard during the discussion of the case.

Influência de um método de treinamento físico militar sobre marcadores indiretos de dano muscular / Influence of a military physical training method on indirect markers of muscle damage

O Exército Brasileiro (EB) desenvolveu recentemente o método de treinamento físico militar Cross Operacional (CO), caracterizado por exercícios combinados aeróbios e resistidos de moderada/alta intensidade. O caráter de moderada/alta intensidade do CO pode levar ao comprometimento das fibras musculares, aumentando o risco de lesão e exacerbação de uma resposta inflamatória aguda. Nesse contexto, a análise de marcadores indiretos de dano muscular pode ser utilizada para avaliação do nível de intensidade do CO e recuperação pós-exercício. O objetivo desse estudo foi observar o efeito agudo do CO sobre os marcadores indiretos de dano muscular em militares do EB. Vinte e quatro militares voluntários, do sexo masculino, com idade média de 20,8 ± 1,8 anos participaram desse estudo. As quatro sessões correspondentes aos níveis do CO foram executadas conforme delineamento cruzado, com washout de sete dias, e as amostras sanguíneas foram coletadas no repouso, imediatamente após, 24 e 48 horas após as sessões de CO. Os marcadores dosados nas amostras foram creatinoquinase (CK), lactato desidrogenase (LDH), aspartato aminotransferase (AST), mioglobina (Mb), lactato (Lac), proteína C reativa (PCR) e haptoglobina (Hp). Em todos os níveis do CO, a CK teve um aumento significativo após 24 horas e o Lac, a LDH e a Mb no momento imediatamente após o CO. Já a AST teve aumento significativo nos níveis 2, 3 e 4, com pico de concentração após 24 horas. Os níveis séricos de PCR aumentaram apenas no momento 24 horas do nível 4 e a Hp após 48 horas do nível 3 do CO. O presente estudo demonstrou que o CO foi capaz de alterar os marcadores indiretos de dano muscular. Todavia, após 48 horas de repouso, os marcadores indiretos de dano muscular apresentaram redução, indicando um processo de recuperação. Apesar das elevações nos marcadores musculares indicadores de dano, a ausência de alterações conclusivas nos níveis séricos das proteínas inflamatórias de fase aguda sugere que o CO pode não ter uma duração ou intensidade suficiente para induzir uma resposta inflamatória sistêmica substancial

The Brazilian Army (EB) recently developed a military physical training method called Cross Operational (CO), which contains combined aerobic and resistance exercises at moderate / high intensity. The moderate / high intensity character of CO can cause impairment of muscle fibers, increasing risk of injury and exacerbation of an acute inflammatory response. In this context, analysis of indirect markers of muscle damage can be used to assess the level of intensity of CO and post-exercise recovery. The aim of this study was to observe the acute effect of CO on indirect markers of muscle damage in military personnel of EB. Twenty-four volunteers, military, male, 20,8 ± 1,8 years old participated in this study. The four sessions corresponding to the CO levels were performed according to a crossover design, with a seven-day washout and the blood samples were collected at rest, after 24 hours and 48 hours after CO sessions. The markers measured in the samples were creatinekinase (CK), lactate dehydrogenase (LDH), aspartate aminotransferase (AST), myoglobin (Mb), lactate (Lac), C-reactive protein (PCR) and haptoglobin (Hp). At all levels of CO, CK had a significant increase after 24 hours and Lac, LDH and Mb increased at the moment immediately after CO. AST had a significant increase in levels 2, 3 and 4 and a peak of concentration after 24 hours. The PCR levels increased only at the 24-hour moment after level 4 and Hp after 48 hours of level 3 of CO. This study demonstrates that CO was able to change the indirect markers of muscle damage. However, after 48 hours of rest, indirect markers of muscle damage were reduced, indicating a recovery process. Despite the elevations in muscle markers indicating damage, the absence of conclusive changes in the levels of the acute phase inflammatory proteins suggests that CO may not have sufficient duration or intensity to induce a substantial systemic inflammatory response

Implicações da dieta hiperlipídica e do exercício de natação sobre os parâmetros imunológicos em ratas

RESUMO Objetivou-se avaliar alterações imunes, entre obesidade e exercício (natação). Ratas Wistar foram alocadas, conforme regime dietético: Grupo Labina (GL) e Grupo Hiperlipídico (GH); e, aos 60 dias, segundo o exercício. Após protocolo de exercício, avaliaram-se parâmetros murinométricos, gordura visceral, série branca do sangue e cultura de macrófagos. Observamos aumento nos parâmetros murinométricos, na gordura visceral do GH sedentário e nos linfócitos, neutrófilos e basófilos do GH exercitado. A taxa de fagocitose e a produção de óxido nítrico estimulado com lipopolissacarídeos aumentaram nos ratos exercitados. A natação parece reverter o fenótipo de sobrepeso, promovido pela dieta hiperlipídica, atenuou os efeitos dessa no sistema imune e melhorou sua resposta.

ABSTRACT The aim was to evaluate immune changes between obesity and swimming. Wistar rats were allocated according to dietary regimen: Labina Group (LG) and Hyperlipid Group (HG); and at 60 days, according to the exercise. After exercise protocol, murinometric parameters, visceral fat, white blood series and macrophage culture were evaluated. We observed an increase in the murinometric parameters and visceral fat of the sedentary HG, and in the lymphocytes, neutrophils and basophils of the exercised HG. The rate of phagocytosis and the production of nitric oxide stimulated with lipopolysaccharides increased in the exercised rats. Swimming seems to reverse the overweight phenotype promoted by the hyperlipid diet and attenuated the effects it on the immune system, improving its response.

RESUMEN El objetivo de este artículo fue evaluar cambios inmunológicos entre obesidad y ejercicio (natación). Se distribuyó a ratas Wistar según el régimen dietético: grupo labina (GL) y grupo hiperlipídico (GH). Y a los 60 días, según el ejercicio. Después del protocolo de ejercicio, se evaluaron los parámetros murinométricos, grasa visceral, serie blanca de la sangre y cultivo de macrófagos. Se observó un aumento de los parámetros murinométricos y de la grasa visceral del GH sedentario, así como en los linfocitos, neutrófilos y basófilos del GH ejercitado. La tasa de fagocitosis y la producción de óxido nítrico estimulado con lipopolisacárido aumentaron en las ratas ejercitadas. Parece que la natación revierte el fenotipo de sobrepeso promovido por la dieta hiperlipídica y atenúa los efectos de esta en el sistema inmunitario, por lo que mejora su respuesta.

Avaliação da atividade imunomoduladora das pectinas in natura e modificadas obtidas de goiabas / Evaluation of immunomodulatory activity of non-modified and modified pectins from guava fruit

As pectinas presentes nas frutas, assim como sua versão modificada, estão entre as biomoléculas mais promissoras no campo da imunomodulação. Este estudo teve como objetivo avaliar o potencial imunomodulador de pectinas obtidas de goiabas verdes e maduras, bem como suas versões modificadas. As goiabas cv. Tailandesas foram avaliadas ao longo do amadurecimento, sendo acompanhadas as alterações da cor da polpa e casca, firmeza, produção de etileno e respiração, perda de massa e o teor de açúcares solúveis. Após a caracterização dos frutos, foram extraídas as pectinas e estas foram caracterizadas quanto ao conteúdo monossacarídico, peso molecular, presença de oligossacarídeos e grau de esterificação. As pectinas in natura de goiaba madura e verde, bem como a versão modificada desta última apresentaram frações de alto e baixo peso molecular, alta proporção de ácido galacturônico e alto teor de esterificação. Por outro lado, as pectinas modificadas derivadas de goiaba madura apresentaram maior desesterificação, com perda de frações de menor peso molecular, menor proporção de ácido galacturônico e baixo teor de esterificação. As pectinas foram incubadas com células THP-1 e RAW 264.7, e apesar da alta viabilidade celular e ausência de efeito citotóxico, resultou em expressiva produção de espécies reativas de oxigênio. De modo geral, as pectinas in natura de goiaba verde e madura, e pectina modificada de goiaba verde promoveram estímulo da produção de citocinas diversas, em especial inflamatórias, como IL-1ß, IL-12, CCL5, CXCL10 e CXCL9, para células THP-1 e IL-10 (antiinflamatória), TNF-α e MCP-1, demonstrando seu potencial imunomodulador, já para células RAW 264.7 as pectinas estimularam a produção de IL-10, TNF-α e MCP-1, demonstrando seu potencial imunomodulador. A pectina modificada derivada da goiaba madura não promoveu a indução significativa de nenhuma citocina. Estes resultados sugerem que as pectinas obtidas a partir de goiabas têm potencial imunomodulador e devem ser estudadas em outros modelos celulares e / ou em concentrações mais altas e modelos in vivo, para que esses benefícios possam realmente ser comprovados

The pectin present in fruits and their modified version are the most promising biomolecules in the immunomodulatory field. This study aimed to evaluate the immunomodulatory potential of pectins obtained from unripe and ripe guavas (Psidium guajava L.) cv. Thailandesa as well as their modified versions. The guavas were characterized during ripening regarding cell wall solubilization, sugar content, firmness, mass loss and ethylene production rate and respiration during 10th following harvest. After fruit characterization, pectins were extracted and characterized for monosaccharide content, molecular weight, presence of oligosaccharides and degree of esterification. Pectins from unripe and ripe guava as well as the modified versions of pectins had high and low molecular weight fractions, a high proportion of galacturonic acid and high esterification content. On the other hand, modified pectins derived from ripe guava showed higher de-esterification, with loss of lower molecular weight fractions, a lower proportion of galacturonic acid and low esterification content. The pectins were incubated with THP-1 and RAW 264.7 cells, and despite the high cell viability and absence of cytotoxic effect, the treatment resulted in the expressive production of reactive oxygen species. In general, pectins from ripe and unripe guava and modified pectin from unripe guava stimulated the production of diverse cytokines, especially inflammatory cytokines, such as IL-1ß, IL 12, CCL5, CXCL10, and CXCL9, for THP-1, while IL-10 (anti-inflammatory), TNF-α and MCP-1 were stimulated in RAW 264.7 cells, demonstrating their immunomodulatory potential. Modified pectin derived from ripe guava did not promote any significant induction of the cytokines investigated. These results suggest that pectins obtained from guavas have immunomodulatory potential and deserve a more in-depth investigation using other cellular models and/or use of higher concentrations and in vivo models tests so their immunomodulatory benefits can be prove